支原体污染的认识、检测、防治
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一、揭秘细胞污染的*杀手——支原体
细胞世界中的*威胁，支原体——这种仅有0.2至0.3微米的小型原核生物，因其无细胞壁特性，能够穿透一般0.22-0.45微米的过滤膜，令人担忧的是，细胞培养中高达63%的感染率，使得它成为全球生物实验室的一大挑战。看似平静的细胞培养液，实则可能潜藏着支原体的暗影，它们悄然改变细胞DNA、RNA和蛋白表达，而不影响生长速率，这使得污染的识别变得极其微妙。
二、支原体污染的来龙去脉
细胞培养中的支原体种类繁多，与人类、牛、猪等生物息息相关。实验室人员是口腔支原体、发酵支原体和人型支原体的主要来源，这些常见于人口咽部的微生物，占污染的半壁江山。精氨酸支原体和无胆甾原体则来自胎牛血清和新生牛血清，而猪鼻支原体可能来自猪源的胰酶。McGarrity的研究揭示，超净台内的细胞传代过程中，污染可能通过污染细胞的消化、移液器和工作区域迅速扩散，即使时间过去了几天，活的支原体依然能在超净台表面存活，警示我们对污染的警惕不容忽视。
三、支原体污染的追踪与检测
检测支原体污染的手段多种多样，包括：
显微镜下的视觉检测，通过相差油镜观察细胞表面和细胞间隙的暗色微粒；
荧光染色法，借助Hoechst 33258染料标记DNA，显微镜下呈现亮绿色小点；
电镜观察，扫描或透射电镜提供快速且详尽的检查；
DNA分子条文检查和支原体培养，准确但过程复杂；
PCR检测，利用基因序列的特异性，快速、灵敏地捕捉污染信号。
四、预防支原体污染的防线
为了抵御支原体，实验室需要做到:
新细胞入库必检测，阳性细胞单独处理；
保持洁净环境，定期消毒生物安全柜和培养箱，消毒工具和耗材；
使用前对培养基和血清进行支原体筛查；
定期打扫，确保实验区域无菌，每次使用前紫外线照射消毒。
五、治标又治本的支原体清除策略
面对已污染的细胞，处理方法包括：
MRA处理，以25μg/ml浓度的支原体清除剂两周内清除；
细胞清洗纯化法，通过细胞驯化、筛选、洗涤和离心，借助微生物浮力差异清除；
药物辅助加温，41℃处理18小时，但可能对细胞造成影响；
使用支原体清除培养基，频繁更换新鲜培养液，密切监测细胞，确保彻底清除，必要时进行后续检测和重复处理。
支原体污染，看似微小却可能带来大麻烦，了解其特性、检测方法与防治策略，是保障细胞培养质量，维护科研成果的关键步骤。
