益肾活血法对慢性肾衰竭大鼠TGF-β_1、CTGF的影响

・１２４８・　中国中医急症２０１１年８月第２Ｏ卷第８期　ＪＥＴＣＭ．Ａｕｇ．２０１１，Ｖｏ１．２０，Ｎｏ．８　・实验研究・　益肾活血法对慢性肾衰竭大鼠ＴＧＦ—ｐ　、ＣＴＧＦ　的影响水　郑　杨　安　平　于水澜　黑龙江中医药大学（黑龙江哈尔滨１５００００）　中图分类号：Ｒ２８５．５文献标志码：Ａ文章编号：１００４—７４５Ｘ（２０１１）０８—１２４８—０２　【摘要】　目的探讨益肾活血法对慢性肾衰竭大鼠肾组织转化生长因子ｐ　（ＴＧＦ—Ｂ。）、结缔组织生长因子　（ＣＴＧＦ）的作用。方法采用腺嘌呤制备慢性肾衰竭动物模型，对模型大鼠灌胃益肾活血复方中药或尿毒清颗　粒；运用免疫组化法观察肾组织ＴＧＦ—Ｂ。、ＣＴＧＦ蛋白表达。结果益肾活血复方中药能降低肾间质中ＴＧＦ—ｐ。、　ＣＴＧＦ蛋白的表达。结论益。肾活血复方中药可通过抑制ＴＧＦ一１３１、ＣＴＧＦ的表达，干预肾间质纤维化，进而延缓　慢性。肾衰竭。　【关键词】益肾活血法慢性肾衰竭转化生长因子Ｂ　结缔组织生长因子　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｔｏｎｉｆｙｉｎｇ　Ｋｉｄｎｅｙ　ａｎｄ　Ａｃｉｔｖａｔｉｎｇ　Ｂｌｏｏｄ　Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　ｏｎ　ＴＧＦ－Ｉｓｌ　ａｎｄ　ＣＴＧＦ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｎｉｃ　Ｒｅｎａｌ　Ｆａｉｌｕｒｅ　Ｒａｔｓ　ＺＨＥＮＧ　Ｙａｎｇ，ＡＮ　，ＹＵ　Ｓｈｕｉ－ｌａｎ　ＨｅｉｌｏｎｇｉａｎｇＵｎｉｆｖｅｒｓ　ｏｆＣｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｈａｒｂｉｎ　１５００００，Ｈｅｉｌｏｎ￣ｉａｎｇ）　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｔｏｎｉｆｙｉｎｇ　ｋｉｄｎｅｙ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｂｌｏｏｄ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　ｏｎ　ＴＧＦ－１３１　ａｎｄ　ｔｈｅ　ＣＴＧＦ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｒｅｎａｌ　ｆａｉｌｕｒｅ　ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｒｅｎａｌ　ｆａｉｌｕｒｅ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ａｄｅｎｉｎｅ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ＴＧＦ—Ｂｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ＣＴＧＦ　ｗｅｒｅ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｓ：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｔｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＴＧＦ—Ｂ１　ａｎｄ　ｔｈｅ　ＣＴＧＦ　ｗｅｒｅ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｔｏｎｉｆｙｉｎｇ　ｋｉｄｎｅｙ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｂｌｏｏｄ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　ｔｈｅｒａｐｙ．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｏｎｉｆｙｉｎｇ　ｋｉｄｎｅｙ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｂｌｏｏｄ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｄｅｌａｙ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｒｅｎａｌ　ｆａｉｌｕｒｅ　ｂｙ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ＴＧＦ－１３１　ａｎｄ　ＣＴＧＦ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ　ｒｅｎａｌ　ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｔｏ　ｄｅｌａｙ　ｔｈｅ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｒｅｎａｌ　ｆａｉｌｕｒｅ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ｔｏｎｉｆｙｉｎｇ　ｋｉｄｎｅｙ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｂｌｏｏｄ；Ｃｈｒｏｎｉｃ　ｒｅｎａｌ　ｆａｉｌｕｒｅ；ＴＧＦ—Ｂｌ；ＣＴＧＦ　益肾活血法是治疗慢性肾衰竭（ＣＲＦ）的常用方法，前期研　究表明该法能延缓ＣＲＦ的发展…。为探讨益肾活血法延缓ＣＲＦ　的作用机制，本实验观察益肾活血法对ＣＲＦ大鼠肾组织转化生　２１ｄ。造模结束后，低剂量组按３．７７￣（ｋｇ・ｄ）灌胃。高剂量组按　１１．３ｇ／（ｋｇ・ｄ）灌胃，尿毒清组按１．８１ｇ／（ｋｇ・ｄ）灌胃。正常组、模型组　给予等体积蒸馏水灌胃，治疗５０ｄ，治疗过程中大鼠死亡５只。　１．４标本采集与检测　大鼠禁食、水２４ｈ后脱颈处死，剖取双　。肾投入４％多聚甲醛固定。采用免疫组织化学法检测肾脏ＴＧＦ—　长因子Ｂ　（ＴＧＦ—ｐ　）、结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ）蛋白表达的作　用。　１材料与方法　Ｂ１、ＣＴＧＦ蛋白表达；根据每张切片阳性反应颗粒的颜色和细胞　雄性ｗｉｓｔａｒ大鼠６０只，体质量２００～２２ｏｓ。黑龙　总数的比例拟订标准。阴性（一）：偶见阳性颗粒，颜色浅黄。弱阳　性（＋）：阳性颗粒少于１／３，颜色呈淡棕黄。阳性（＋＋）：阳性颗粒　１．１　实验动物江中医药大学实验动物中心提供。　１．２　实验药物　益肾活血复方：由黑龙江省中医研究院提供，　常规煎煮，将滤液浓缩为２ｇ／ｍＬ；尿毒清颗粒：广州康臣药业有　限公司，批号Ｚ１０９７０１２２。腺嘌呤，美国ＡＭＲＥＳＣＯ公司，批号　介于１／３～２／３之间，颜色介于＋～＋＋＋间。强阳性（＋＋＋）：阳性颗粒　大于２／３，颜色棕褐。对结果进行定量统计，并赋分，（一）：１分；　（＋）：２分；（＋＋）：３分；（＋＋＋）：４分。每张切片观察３个视野。　０２７２Ｂ３１。兔抗大鼠ＴＧＦ—Ｂ　、ＣＴＧＦ多克隆抗体，武汉博士德生　物工程公司提供；二步法免疫组化检测试剂，北京中山生物技术　有限公司提供。　１Ｉ３造模与给药　６０只大鼠随机分为５组，每组１２只。即正常　１．５　统计学处理　等级资料用Ｒｉｄｉｔ分析。ＪＰ＜０．０５为差异有统　计学意义。　２结　果　２．１　益肾活血法对大鼠肾组织ＴＧＦ—Ｂｌ的影响　见表ｌ。模型　组ＴＧＦ—Ｂ，表达阳性积分明显高于正常组和高剂量组，两组与　模型组比较有极显著差异（尸＜Ｏ．０１）。高剂量组阳性表达与尿毒　清组比较有显著差异（Ｐ＜０．０５）。　２．２益肾活血法对大鼠肾组织ＣＴＧＦ的影响　见表２。模型组　组、模型组、尿毒清组、益肾活血法低剂量治疗组（低剂量组）、益　肾活血法高剂量治疗组（高剂量组）。除正常组外，其余各组予　２．５％腺嘌呤２５０ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）灌胃，正常组给予等量蒸馏水，连续　基金项目：教育部‘‘春晖计划”合作科研项目立项资助课题　（Ｚ２００９－１－１５０３８）　ＣＴＧＦ表达阳性积分明显高于正常组和益肾活血法高剂量组，　正模尿高低　常型毒剂剂　组组清量量　中国中医急症２０１１年８月第２０卷第８期　ＪＥＴＣＭ．Ａｕｇ．２０１１．Ｖｏ１．２０．Ｎｏ，８　组组组　・１２４９・　表１各组大鼠肾组织ＴＧＦ一１３。表达比较（ｎ）　组别　ｎ　Ｏ　１　６　３　２　８　９　ｌ　Ｏ　进细胞外基质增生，胶原分泌，对成纤维细胞有趋化作用，激活　阳性积分（分）　＋＋＋　肾间质成纤维细胞并使其增殖。ＣＴＧＦ在ＴＧＦ—Ｂ　的诱导下，参　与间质成纤维细胞的增生、移动、黏附，肾小管上皮细胞的转化。　促进细胞外基质的过量合成，导致肾间质纤维化。　Ｏ　２　１　２　３　４　ｌ４　４　３　１　２７　２６　１９　ＨＥ染色结果证实＿ｌ＿，模型组肾小管萎缩，间质炎症细胞浸　润，间质增宽，说明肾间质纤维组织明显增生。益肾活血法高剂　量组肾小管萎缩、间质炎症细胞浸润、间质增宽较模型组明显减　轻。免疫组化证实，模型组肾间质中ＴＧＦ—Ｂ，、ＣＴＧＦ蛋白表达明　显增多，用益肾活血法高剂量治疗后肾间质纤维组织增生明显　减少，ＴＧＦ—Ｂ　、ＣＴＧＦ蛋白的表达减弱。说明益肾活血的作用机　０　３　３　１　２　１　２１　与模型组比较，￥Ｐ＜０．０ｌ；尿毒清组比较，△Ｐ＜０．０５。下同。　表２各组大鼠肾组织ＣＴＧＦ表达比较（ｎ）　制可能通过降低ＴＧＦ—Ｂ，表达，进而降低ＣＴＧＦ表达；或者通过　抑制降低ＣＴＧＦＡ表达，抑制ａ—ＳＭＡ转化成ＭｙｏＦＢ．进而抑制　肾小管间质细胞分裂增殖，胶原合成减少．延缓肾间质纤维化进　程。　慢性肾衰竭以脾肾阳气虚衰为本，湿浊、瘀血为其标，益肾　活血复方针对此病机，以补肾活血为主，兼以化浊解毒。方中黄　芪补气，巴戟天等滋肾助阳；桃仁、红花、丹参等活血化瘀．当归　两组与模型组比较有极显著差异（Ｐ＜０．０１）。高剂量组阳性表达　养血活血，黄连、大黄解毒，苍术温化湿浊，诸药合用标本兼治。　参考文献　与尿毒清组比较有显著差异（尸＜０．０５）。　３讨论　［１］郑杨，张浩，李淑菊，等．益肾活血法延缓慢性肾衰竭的实验研究［Ｊ］　中医药信息，２００５，２２（６）：５６—５７．　。肾间质纤维化的形成主要为肾小管上皮细胞损伤后的细胞　因子网络失调导致的恶性循环，其中ＴＧＦ—Ｂ　、ＣＴＧＦ是最重要的　质纤维化的因子之一。ＴＧＦ—Ｂ。主要分布在肾小管间质，具有促　（收稿日期２０１１—０３—３１）　（上接第１２２０页）　２－３　不良反应　治疗组未见明显不良反应：对照组２　动力学的改变，甚至发展至心力衰竭，这些环节都可以　成为心律失常的成因和诱发因素。神经调节功能失去　平衡，精神紧张、工作压力过大、用脑过度等，影响心脏　的植物神经功能，也会导致心律失常的发生。当归、炙　甘草、黄连、瓜蒌皮等具有抗心律失常，抗心肌缺血作　例出现心动过缓，３例出现Ｐ—Ｒ间期延长，遂停药。　３讨　论　早搏属中医学“心悸”、“怔忡”范畴。随着社会经济　的发展，生活节奏的加快，人们的工作和生活压力越来　越大，临床上早搏患者也在不断增加。心悸的发生，与　情志内伤的关系极为密切，《医学正传・怔忡惊悸健忘　证》云“夫怔忡惊悸之候，或因怒气伤肝，或因惊气入　胆，母能令子虚，因而心血为之不足，又或遇事繁冗，思　用：当归、丹参、白芍、川芎、黄连、瓜萎皮等可抑制血小　板聚集，抗血栓形成，改善微循环，柴胡、龙齿、白芍、炙　甘草、茯苓等有明显镇静、稳定细胞膜的作用。川芎、白　芍、当归、炙甘草等能降低和清除氧自由基，提高超氧　化物歧化酶活性和降低心肌与血浆中游离脂肪酸含　想无穷，则心君亦为之不宁，故神明不安而怔忡惊悸之　证作矣”。七情内伤，气机怫郁，肝失条达，心脉欠畅，心　肝血行不畅，脉道不通，肝气郁结，肝气乘脾，脾失健　运，生血无源．血不养心，心神不宁，故而心悸怔忡时　量．保护心肌免受缺血损伤　。诸药合用，可协同改善　心肌缺血、缺氧，抗心律失常，调节心脏植物神经功能，　清除氧自由基，保护心肌细胞，起到标本同治的作用。　疏肝健脾活血安神汤可有效控制早搏的发生，提高患　者的生活质量。不影响心率及房室传导，避免西药的毒　副作用，安全性好，不良反应少，疗效确切，值得临床推　广应用。　参　考文献　作。治宜疏肝健脾、活血安神。本方中，柴胡疏肝解郁，　茯神健脾安神，白芍、当归、丹参养血活血，白术、炙甘　草补气，川芎、瓜蒌皮理气宽胸，龙齿镇静安神，黄连泻　火除烦、清心安神。诸药合用，共奏疏肝健脾、活血安神　之功。　早搏可发生于各种器质性心脏病．包括冠心病、高　血压心脏病、心肌病、心肌炎等，也可发生于无明显器　质性心脏病者。各种器质性心脏病的致病因素和病理　生理过程中的变化损害心肌，导致心脏结构功能、血流　［１］吴少祯，吴敏．常见疾病的诊断与疗效判定（标准）［Ｍ］．北　京：中国中医药出版社，１９９９：５５—５６．　［２］蔡永敏，任玉让，王黎．最新中药药理与临床应用［Ｍ］．北　京：华夏出版社，１９９９：３３—４８８．　（收稿日期２０１１—０１—２７）