JOURNAL OF PEKING UNIVERSITY（ HEALTH SCIENCES） Voi. 36 No. 1 Feb. 2004 ·论著·
内源性一氧化氮与硫化氢在大鼠低氧性肺动脉高压中的相互作用
11
张清友 ，杜军保 ，石
琳1 ，张春雨1 ，闫
辉 ，唐朝枢12
（北京大学第一医院 1. 儿科，2. 心血管病研究所，北京 100034） ［ 关键词］一氧化氮；硫化氢；低氧；肺动脉高压
［ 摘 要］目的：研究一氧化氮（ nitric oxide，NO）/ 一氧化氮合酶（ nitric oxygnase，NOS）体系和硫化氢（ hydrogen sui-fide，H2 S）/ 胱硫醚 !-裂解酶（ cystathionine-!-iyase，CSE）体系在低氧性肺动脉高压发生机制中的作用及其相互关
\"
系。方法：将 25 只大鼠随机分为 4 组：低氧组（7 只）、低氧 + !-NAME 组（给与 NOS 抑制剂 N -硝基-!-精氨酸甲酯处理的低氧组，6 只）、低氧 + PPG 组（给与 CSE 抑制剂炔丙基甘氨酸处理的低氧组，6 只）和对照组（6 只）。低氧 21 d 后，测定肺动脉平均压、血浆 NO 及 H2 S 含量，分别测定低氧组、低氧 + !-NAME 组及对照组 CSE 活性，应用免疫组织化学的方法检测低氧组、低氧 + PPG 组及对照组的肺动脉内皮细胞 eNOS 表达。结果：低氧 21 d 大鼠肺动脉平均压力明显增高，同时血浆中 NO 和 H2 S 含量、肺动脉内皮细胞 eNOS 表达及肺组织 CSE 活性亦明显下降；而低氧 + !-NAME 组，伴随着 NO 含量的下降，肺动脉平均压显著上升，同时，血浆中的 H2 S 含量及肺组织 CSE 活性较低氧组显著上升；在低氧 + PPG 组，伴随血浆 H2 S 含量的降低，肺动脉压力显著升高，同时血浆中的 NO 含量及肺血管内皮细胞 eNOS 表达也较低氧组显著上升。结论：内源性 NO / NOS 体系与 H2 S / CSE 体系在低氧性肺动脉高压中呈现相互的负性调节作用。它们既相互独立又以网络调节的方式共同参与低氧性肺动脉高压形成的调控机制。［中图分类号］R331 ［文献标识码］A ［文章编号］1671-167X（2004）01-0052-05
Interaction between endogenous nitric oxide and hydrogen sulfide in pathogenesis of hypoxic pulmonary hypertension
ZHANG Oing-you ，DU Jun-bao ，SHI Lin ，ZHANG Chun-yu ，YAN Hui ，TANG Chao-shu
（1. Department of Pediatrics，2. Institute of Cardiovascuiar Research，Peking University First Hospitai，Beijing 100034，China） KEY WORDS
111112
SUMMARY Objective：To investigate the interaction between nitric（ NO）/ nitric oxygenase（ NOS） and
Nitric oxide；Hydrogen suifide；Hypoxic；Puimonary hypertension
hydrogen suifide（ H2 S）/ cystathionine-!-iyase（ CSE）system in the pathogenesis of hypoxic puimo-nary
hypertension. Methods：25 rats were randomiy divided into four groups：hypoxic group（ \" = 7 ）， hypoxic + !-NAME group（ \" = 6 ），hypoxic + PPG group（ \" = 6）and controi group（ \" = 6 ）. After 21 days，puimonary atery mean pressure（ mPAP）of each rat was evaiuated，and the piasma concentration of H2 S and NO was measured. Meanwhiie，the activities of CSE in puimonary tissue in hypoxic，hypoxic + !-NAME and controi groups were detected，respectiveiy，and expressions of NOS in puimonary arteries in hypoxic，hypoxic + PPG and controi groups were aiso detected by immunohistochemistry technigue. Results：mPAP was significantiy increased in hypoxic rats as compared with normai controis. Meanwhiie， compared with controis，the production of NO and H2 S in piasma，the activity of CSE in puimonary tissue and expression of NOS in puimonary arteries were markediy decreased in hypoxic rats. However，mPAP was significantiy increased in hyopxic + !-NAME group as compared with hypoxic groups，and at the same time，the piasma concentration of NO was markediy decreased. However，the piasma concentration of H2 S and the activity of CSE in puimonary tissue in hyopxic + !-NAME group were increased signifi-cantiy as compared with those of hypoxic group. PPG aiso worsened puimonary hypertension of hypoxic rats，however，it increased
endogenous production of NO and the expression of NOS of puimonary arteries obviousiy. Conclusion：There is a negative feed back effect between NO / NOS system and H2 S / CSE sys-tem in deveiopment of hypoxic puimonary hypertension. They might interact with each other and there-
基金项目：教育部博士学科点专项科研基金（20020001063）、国家重大基础研究发展规划项目基金（ G2000056905）和国家自然科学基金（30271373）资助 Supported by the Doctorate Training Program Foundation of the Ministry of Education of China（20020001063），the Major State Basic Reseach Deveiopment Program of Peopie’s Repubiic of China（ G2000056905）and the Nationai Naturai Sciences Foundation of China（30271373） ACorresponding author emaii，junbaodu@ ht. roi. cn. net
张清友，等 内源性一氧化氮与硫化氢在大鼠低氧性肺动脉高压中的相互作用
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fore play an important regulating role in hypoxic pulmonary hypertension.
（ Peking Uniu［ Health Sci］，2004，36：52 - 56）
低氧性肺动脉高压是临床众多心、肺疾病发生、 发展过程中重要的病理生理环节，阐明其发病机制 ［1］
低氧实验结束后（第 22 天），给大鼠腹腔注射 120 g / L 乌拉坦 10 mL / kg 体重麻醉，用右心导管法 是当今该领域亟待解决的重要课题 。内源性气体信号分子一氧化氮（ nitric oxide，NO）和一氧化碳（ carbon monoxide，CO）的发现，将低氧性肺动脉高压的发病机制研究带入了一个全新阶段。而最近发现人体内含硫氨基酸代谢产物，过去一直被认为是毒性气体的硫化氢（ hydrogen sulfide，H2 S）具有重要的生物学功能。人们推测 H2 S 可能是在 NO 和 CO
之外机体的第 3 种气体信号分子
［3］ ［2］ 。我们课题组近 期的研究发现 ，内源性 H2 S 体系的下调也是低氧
NO 和 H2 S 都是小分子气体，能自由通过各种生物性肺动脉高压及肺血管结构重构的重要机制之一。 膜，并具有持续产生、传播迅速、弥散性强和作用广泛的特点，而二者又主要分别来自内皮细胞和平滑肌细胞等不同类型的细胞，在病生理状态下发挥着重要的生物学功能。那么心肺血管系统是否存在由
NO 与 H2 S 构成的信号调节网络？基于以上问题， 我们将内源性 NOS 抑制剂 N! -硝基-L-精氨酸甲酯（ N! -nitro-L-arginine methyl ester，L-NAME）及
CSE
的抑制剂炔丙基甘氨酸（ Propargylglycine，PPG） ［4］ 应用于慢性低氧大鼠，观察了肺循环的 H2 S / CSE 系
统和 NO / NOS 系统的变化，来探讨两系统在低氧性肺动脉高压发生机制中的作用及其意义。 1 材料与方法
1. 1 低氧肺动脉高压大鼠动物模型复制及实验分 组 选取体重 180 ~ 200 g 的健康雄性 Wistar 大鼠 25 只，随机分为：对照组（ n = 6），低氧组（ n = 7），低
氧 + L-NAME 组（ n = 6 ）和低氧 + PPG 组（ n = 6 ）。将低氧组和低氧 + L-NAME 组大鼠置于常压低氧舱
内［含 10%（体积分数）O2 ，90%（体积分数）N2 ］，每天连续低氧 6 h，共 21 d。对低氧 + L-NAME 组大鼠每天低氧前腹腔注射 L-NAME（5 mg / kg，每次使用前新鲜配制）；低氧 + PPG 组大鼠按文献［4］所述每天低氧前腹腔注射 PPG（30 mg / kg）。低氧组及对照组大鼠腹腔注射等量生理 盐水。各组大鼠饮食及饮水条件相同。
1. 2 血流动力学测定及标本制备
测定肺动脉平均压（ mPAP），颈动脉插管测定体循环平均压（ mAP）。从肺动脉中取血 5 mL，置于肝素抗凝管中，离心后取血浆检测 H2 S 含量或 / 和 NO 含
量。打开胸腔取一侧肺叶以 10%（体积分数）甲醛溶液固定，梯度乙醇顺序脱水，二甲苯透明，石蜡包埋切片（厚 5 \"m），用于免疫组织化学分析。取另一侧肺叶经液氮迅速冷冻后 - 70 C 保存，制备肺组织匀浆。
1. 3 血浆 NO 含量的间接测定
硝酸还原酶测定法。因 NO 化学性质活泼，半衰期极短，迅速与分子氧反应生成 NO2 - 和 NO3 - ， --故以血浆或肺组织匀浆 NO2 和 NO3 之和检测 NO
的相对含量，应用 Bioting-tech 公司提供的 NO 测定试剂盒，采用硝酸还原酶特异性地将 NO3 - 还原为 偶氮化合物，通过比色测出 NO2 - / NO3 - 含量。
--NO2 ，NO2 与显色剂亚乙烯二胺作用，生成粉红色1. 4 血浆中 H2 S 含量测定 ［3］ 采用去蛋白的方法 。首先在试管中加入 10 g / L 醋酸锌 0. 5 mL，然后加入 0. 1 mL 血浆标本，振荡混匀，使血浆中的硫离子与醋酸锌充分反应形成硫化锌沉淀而固定下来；再依次加入 20 mmol / L 对
苯二胺盐酸盐 0. 5 mL 和 30 mmol / L 三氯化铁 0. 5 mL，室温孵育 20 min 使之充分显色。再加入 10%
（体积分数）三氯醋酸 1 mL 使蛋白沉淀下来，加 2. 5 mL 蒸馏水补足体积至 5 mL。6 000 r / min 离心 5 min，吸出上清液，用分光光度计在波长 670 nm 处检测上清液的吸光度。根据 H2 S 标准曲线计算上清液中 H2 S 的含量。
1. 5 肺组织 CSE 活性测定参照文献［5］方法测定对照组、低氧组及低氧
+ L-NAME 组的肺组织 CSE 活性。取大鼠肺组织在
冰冷的 50 mmol / L pH 6. 8 的磷酸钾缓冲液中研磨成匀浆。反应在 25 mL 锥形瓶中进行，反应体积 1 mL，含 100 mmol / L pH 7. 4 的磷酸钾缓冲液、10 mmol / L L-
半胱氨酸、2 mmol / L 5*-磷酸吡哆醛和 10 g / L 的组织匀浆。在中央室中加入 10 g / L 的醋酸锌 0. 5 mL，并放入滤纸增加吸收面积。用氮气将锥形瓶充盈 30 s 后石蜡膜封口，转移到 37 C 水浴摇床中开始反应。90 min 后向其中注入 500 g / L 的三
氯醋酸 0. 5 mL 中止反应，继续水浴 60 min 后将中央室的内容物转移到含 3. 5 mL 蒸馏水的试管中，加入 20 mmol / L 对苯二胺盐酸盐 0. 5 mL 和 30
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北 京 大 学 学 报 （ 医 学 版 ） JOURNAL OF PEKING UNIVERSITY（ HEALTH SCIENCES） VOl. 36 NO. 1 FGb. 2004
mmOl / L三氯化铁 0. 4 mL。室温孵育 20 min 后用 对照组降低 61. 27% ；而低氧 + L-NAME 组大鼠肺组 分光光度计在波长 670 nm 处检测溶液吸光度值。根 据 H2 S 标准曲线计算溶液中 H2 S 的产量。组织中 CSE 活性以单位重量的组织在单位时间内生成 H2 S 的量［以 !mOl（/g·min）表示］。 1. 6 GNOS 的免疫组织化学检测
含量较对照组和低氧组分别降 织匀浆 NO2 - / NO3 低 89. 04% 和 71. 32%（ P < 0. 01）。
-
对照 2. 1. 3 L-NAME 对血浆 H2 S 含量的影响 组、低氧组及低氧 + L-NAME 组 3 大鼠血浆中 H2 S 含量之间差异具有显著性（ P < 0. 01）。低氧 21 d
大鼠血浆中 H2 S 含量较对照组降低 33. 43% ，差异具有显著性（ P < 0. 01）。而低氧 + L-NAME 组大鼠血浆中 H2 S 含量较低氧组增加 32. 33% ，差异具有显著性（ P < 0. 05）； 检测对照组、低氧组及低氧 + PPG 组大鼠肺动脉内皮细胞 GNOS 表达。肺组织石蜡切片经常规脱蜡水化，3%（体积分数）H2 O2 消除内源性过氧化物酶 20 min，血清封闭 30 min，滴加一抗（ GNOS 免疫组织化学检测试剂盒，天津 TBD 生物技术公司），37 C 湿盒孵育 2 1，顺序滴加二抗（生物素化羊抗兔
IgG）、三抗（辣根链酶卵白素），分别置 37 C 湿盒孵育 1 1，DAB 显色，苏木素复染。阴性对
2. 1. 4 L-NAME 对肺组织 CSE 活性的影响 肺组织 CSE 活性在对照组、低氧组及低氧 + L-NAME 组 3 组大鼠之间的差异具有显著性（ P < 0. 01）。低氧 照以血清代替一抗，其余步骤相同。光学显微镜下，细胞质呈棕黄色为阳性信号。 21 d 大鼠肺组织 CSE 活性较对照组降低53. 07% ， 差异具有显著性（ P < 0. 01）。而低氧 + L-NAME 组
半定量积分分析：根据肺内动脉的外径将其分为 大型肺动脉（ > 150 !m）、中型肺动脉（50 ~ 150
大鼠肺组织 CSE 活性较低氧组增加 39. 53% ，差 异具有显著性（ P < 0. 05）。
!m）和小型肺动脉（15 ~ 50 !m）。每份标本中各级 肺动脉至少检测 6 ~ 10 条，分别判定每条肺动脉内皮 2. 2 PPG 对肺动脉压力及内源性 NO / NOS 的影响
（ 表 2）
细胞 GNOS 阳性表达的百分比。将 GNOS 的表达强度分为 3 级：- ，+ ，+ + ，分别代表肺动脉中 0，＄50% ，> 50% 且 ＄100% 的内皮细胞呈现阳性表达。为了便于理解，将肺动脉内皮细胞中 GNOS 含 2. 2. 1 PPG 对肺动脉压力的影响 肺动脉压力在对照组、低氧组及低氧 + PPG 组 3 组大鼠之间差异
量用积分值表示，即 GNOS 不同表达强度的肺动脉的百分比乘以反应强度加权值（ - ，+ 和 + + 的反应强度加权值分别为 0，50 和 100）。 1. 7 统计学分析
有显著性（ P < 0. 01）。低氧 21 d 大鼠肺动脉压力较对照组增加 46. 57% ；而低氧 + PPG 大鼠肺动脉压力较对照组和低氧组分别增加 75. 61% 和 19. 87%（ P < 0. 05）。
2. 2. 2 PPG 对血浆 H2 S 含量的影响 对照组、低氧组及低氧 + PPG 组 3 组大鼠血浆中 H2 S 含量之间差异具有显著性（ P < 0. 01）。低氧组大鼠血浆 数据均以均数 1 标准差（ x 1 s）表示，多组间比较 用单因素方差分析（ F 检验），两两比较用 g 检验。
应用 SPSS10. 0 统计软件进行。 H2 S 含量较对照组降低 40. 58%（ P < 0. 01），而低氧 + PPG 组大鼠血浆 H2 S 含量较对照组和低氧组分 别降低 51. 73% 和 27. 45%（ P < 0. 05）。
2. 2. 3 PPG 对血浆 NO2 - / NO3 含量的影响 -
2 结果
2. 1 L-NAME 对肺动脉压力及内源性 H2 S / CSE 的
血 浆的 NO2 - / NO3 - 含量在对照组、低氧组及低氧 + PPG 组 3 组大鼠之间差异具有显著性（ P < 0. 05）。 低氧 21 d 大鼠血浆中 NO2 - / NO3 - 含量较对照组降 低 61. 32% ，差异具有显著性（ P < 0. 01）。而低氧 + 含量较低氧组增加 PPG 组大鼠血浆中 NO2 - / NO3 54. 94% ，差异具有显著性（ P < 0. 05）。 2. 2. 4 PPG 对肺动脉血管内皮 GNOS 表达的影响
3 级肺内动脉内皮细胞 GNOS 蛋白表达在对照组、-
影响（表 1） 2. 1. 1 L-NAME 对肺循环血流动力学的影响 肺动 脉压力在对照组、低氧组及低氧 + L-NAME 组 3
组大鼠之间差异有显著性（ P < 0. 05）。低氧 21 d 大鼠肺动脉压力较对照组增加 46. 57% ；低氧 + L- NAME 组大鼠肺动脉压力较对照组和低氧组分别增
--2. 1. 2 L-NAME 对血浆 NO2 / NO3 含量的影响血--浆的 NO / NO 含量在对照组、低氧组及低氧 + 23
加 72. 39% 和 17. 61%（ P < 0. 05）。 L-NAME 组 3 组大鼠之间差异具有显著性（ P < 0.
--01）。低氧组大鼠肺组织匀浆 NO2 / NO3 含量较 低氧组及低氧 + PPG 组 3 组大鼠间差异具有显著性（ P < 0. 01）。其中低氧组大鼠大、中、小 3 级肺动脉内皮细胞 GNOS 蛋白表达积分值均较对照组明显减少；低氧 + PPG 组大鼠该积分值较低氧组有显著增
加（P < 0. 05）。 张清友，等 内源性一氧化氮与硫化氢在大鼠低氧性肺动脉高压中的相互作用
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表 1 L-NAME 对低氧大鼠肺动脉压力及内源性 H2 S / CSE 体系的影响（ x 1 s） Table 1 L-NAME reguIated puImonary hypertension and endogenous H2 S / CSE system（ x 1 s）
Activity of CSE of Iung
Group
Rat
mPAP
（ mm Hg） Serum NO2 / NO3 -- Serum H2 S
（ I） 7 6 6 （ !moI / L） （ !moI / L） ［ !moI（/ g·min）］
Hypoxic
20. 5 1 2. 8 ＊ 24. 1 1 0. 6 ＊#
31 1 9 ＊ 9 1 4 ＊# 81 1 23
196 1 22 ＊ 289 1 19 #
0. 130 1 0. 022 ＊ 0. 215 1 0. 086 #
Hypoxic + L-NAME
ControI
14. 0 1 3. 2 294 1 26
0. 277 1 0. 089
＊P < 0. 01，compared with controI group；#P < 0. 05，compared with hypoxic group；1 mm Hg = 0. 133 kPa.
表 2 PPG 对低氧大鼠肺动脉压力及内源性 NO / NOS 体系的影响（ x 1 s）
Table 2 PPG reguIated puImonary hypertension and endogenous NO / NOS system（ x 1 s） Rat Group
mPAP Serum H2 S Serum NO2 / NO3 --
eNOS expression in endotheIiaI ceIIs Large （ I） 7 6 7 （ mm Hg） （ !moI / L） （ !moI / L） 31 1 9
＊
Median
SmaII 57 1 1186 1 7
Hypoxic Hypoxic + PPG 20. 5 1 2. 8 ＊ 24. 6 1 0. 7 ＊#
196 1 22 ＊ 142 1 45 ＊# 294 1 26
66 1 6＊ 61 1 1577 1 1186 1 5
＊ ＊
＊
69 1 21
#
75 1 14# #
ControI
14. 0 1 3. 2 81 1 23 80 1 8 88 1 7
＊P < 0. 01，compared with controI group；#P < 0. 05，compared with hypoxic group；1 mm Hg = 0. 133 kPa.
3 讨论
现，内源性 NO 在低氧性肺动脉高压大鼠中对 H2 S / CSE 体系呈现为抑制作用。当应用 L-NAME 阻断内源性 NO 生成时，体内的 H2 S 水平升高，CSE 的活性增高。我们前期的研究显示，在慢性低氧性肺动脉高压时，内源性 NO 含量、NOS 蛋白和基因表达均明显下调，而诱导肺内 NOS 的高表达，可增加体内 NO
同样，我们还发现内源性 H2 S 在低氧性肺动脉高压大鼠中对 NO / NOS 体系亦呈现为抑制作用。当应用 PPG 阻断内源性 H2 S 生成时，体内的 NO 水
平升高，内皮细胞 eNOS 蛋白表达亦增高。也就是说，内源性的 NO / NOS 体系和 H2 S / CSE 体系在
和胱硫醚 #-裂解酶（ cystathionine-#-Iyase，CSE）可以催化半胱氨酸分解代谢产生内源性 H2
Hosoki 等［8］7
S［］。1997
含量，防治低氧性肺动脉高压和肺血管结构重建［6］。H S 过去一直被认为是毒性气体，近年来被发2
现具有与 NO 和 CO 相似的生物学特征，开始引起了人们的重视。在机体内，5*-磷酸吡哆醛依赖酶包括胱硫醚 \"-合成酶（ cystathionine -\"-synthase，CBS） 年，低氧性肺动脉高压形成中存在相互的负性调节作用。已知肺血管张力的调节就是依赖于血管壁不同类型细胞释放的血管收缩因子、舒张因子和生长因子之间
［9］ 发现，H2 S 可以舒张大鼠的血管平滑肌，降
的反馈作用 。而 NO 和 H2 S 这两种气体分子均为 ［8］ 低动脉血压。我们课题组近期的研究发现，在大鼠低氧性肺动脉高压时，机体内源性 H2 S 体系下调，补充 H2 S 对低氧诱导的肺动脉高压和肺血管结构重构有明显的缓解作用［
3］。因此提示，内源性 H2 S 体系的下调也是低氧性肺动脉高压及肺血管扩张血管因子，亦均为抑制增殖因子 。因此，这种作用相似的气体信号分子的相互负性调节作用，在低氧性肺动脉高压形成中的意义非常重要，它避免了两种作用相似的因子呈同向变化，使机体能在病理状态达到一种新的平衡，避免了肺动脉压力过度升高，是机体的一种自我保护性调节。
结构重构的重要机制之一。 本研究结果亦证实，在低氧 21 d 大鼠体内 NO
含量和 H2 S 含量均下降，无论是给予内源性 NOS 抑 制剂 L-NAME 阻断内源性的 NO 生成还是给予 CSE
的抑制剂 PPG，伴随着体内 NO 或 H2 S 水平的下有关 NO 对 H2 S / CSE 体系影响的研究，我们的研究结果与其他的学者并不相同。有学者通过离体的大鼠胸主动动脉与 NO 供体———硝普钠共同孵育
90 min，发现 H2 S 的生成量呈浓度依赖性地增加，并 ［5］ 降，肺动脉压力会进一步升高。以上的研究揭示了内源性 NO 和 H2 S 在低氧性肺动脉高压形成中的重要病理生理意义，然而两系统在低氧性肺动脉高压这一过程中的相互作用尚没有阐明。我们通过本实验发 发现 NO 的供体能增加 CSE 基因的转录水平 。我们的实验结果之所以与该学者不同，我们认为可能有 3 点原因：一是我们的实验是在体的整体动物实验，与离体实验有较大不同；二是我们的实验是在病理条件下的实验结果，与在离体的生理条件下的试 北 京 大 学 学 报 （ 医 学 版 ） ·56·
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验也不同；三是上述实验是在离体的胸主动脉上得出的结果，而我们研究的是肺动脉。
在低氧性肺动脉高压时，内源性 NO 对 H2 S / CSE 体系有抑制作用，但这种抑制作用的发生机制并不清楚。我们推测可能与以下因素有关：一是
NO 是一种性质活泼的气体分子，而在 CSE 蛋白中又有一不稳定的巯基，因此 NO 可直接作用于 CSE
两种主要细胞即内皮细胞和平滑肌细胞之间的对话，内皮细胞和平滑肌细胞通过各自所分泌的气体分子，以一种快速的安全的方式（气体信号具有迅速弥散并迅速消失的特点）相互调节。对于维持机体稳态具有重要的病理生理意义。
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内源性 H2 S 对 NO / NOS 体系的影响，尚未见相关报道。只是有人曾推测 H2 S 可抑制 NOS 的合 成
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本研究从气体信号调节网络、细胞与细胞间直接对话这些崭新的视角出发，揭示出慢性低氧这一病理状态下内源性 NO 和 H2 S 的相互调节特点，即内源性的 NO / NOS 体系和 H2 S / CSE 体系在低氧性肺动脉高tion and methyiation in bromobenzene-treated Syrian
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7 耿 彬，杜军保，唐朝枢. 内源性 H2 S—一种新的气体信号分子
（ 本文编辑：任英慧） ·消息·
国内首例应用冻融人卵子助孕妊娠在北京大学第一医院生殖与遗传中心获得成功
经北京大学第一医院生殖与遗传中心确定，今年 8 月国 内首例应用冻融人卵子助孕在该院妊娠成功。截至目前，已 有 4 例应用此技术获得成功，填补了国内空白。 卵子冷冻技术是辅助生育领域中的一种新技术，是通过 冷冻技术保存卵子，为日后需要生育时借助辅助生育技术达 到生育的目的。卵子冷冻技术不仅可以解决胚胎冷冻所带 来的伦理、法律、道德、宗教等多方面的问题，而且也是妇女 生育力的有效储备形式。 北京大学第一医院生殖与遗传中心李晓红主任经过近 两年大量反复试验，对降温程序、细胞的脱水、脱水过程中因 渗透而产生的形态改变、冷冻保护剂的毒性、纺锤体的损伤 等问题进行了深入探讨。卵母细胞冷冻保存的关键是防止 细胞内冰晶的形成。他们巧妙地结合了渗透性及非渗透性 保护剂的特性，达到了在细胞变形程度最小的条件下有效地 脱水，防止了细胞内冰晶的形成。通过对解冻卵子的培养和 观察，发现经冷冻损伤纺锤体是可以恢复的，这说明经冷冻 的卵母细胞不仅在形态学上获得了复苏，而且真正达到了生 物功能的恢复。他们关于程序化冻存人卵技术的专利申请 已被国家知识产权局受理。该方法目前已经成为北京大学 第一医院生殖与遗传中心常规的应用技术，其突出优势是能 够提高人卵母细胞冻存后的存活率，可达到 95% ，显著高于 国外同行报道的 70% ~ 80% 。该中心迄今冻存人卵时间最 长的已超过 1 年。 目前在美国、韩国等已有妊娠成功的个案，但由于技术 上的复杂性及冻卵的存活率、受精率低，此技术发展缓慢。 世界上通过此项技术获得妊娠的还是很少。北京大学第一 医院应用冻融卵母细胞获妊娠的成功标志着生殖与遗传中 心配子冷冻技术达到了国际先进水平，为人卵子冷冻保存提 供了有效的途径。 （北京大学第一医院生殖与遗传中心 张 晓）
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