长沙健路医学检验所有限公司-九项遗传性耳聋基因检测试剂性能验证报告(全血修改)

九项遗传性耳聋基因检测试剂性能验证报告

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目 录

一、 验证目的 二、 验证内容和方法

1. 对象 2. 内容与方法3. 设备 4. 实验要求 5.

操作程序

三、 验证结果

1. 阳性符合率2. 阴性符合率3. 空白验证 4. 检测重复性5.

检测灵敏度四、 结果说明 五、 验证结论

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一、 验证目的

本实验室计划使用北京博奥生物集团有限公司晶芯®九项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法）[国食药监械（准）字 2013 第 3401518 号]开展相 关检测项目，根据《ISO15189：医学实验室-质量和能力的专用要求》，为保证实验室按照厂家所提供的试剂盒或检测系统说明书使用时，能复现生产厂家所宣称的检测性能，按照实验室质量管理计划，对生产厂家提供的试剂盒和检测系统进行了性能验证，报告如下。

二、 验证内容与方法

1. 对象

1.1 晶芯®九项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法）

1.2 基因组 DNA 提取试剂盒为北京康为世纪有限公司血液基因组非柱式提取试剂盒（CW0544）

1.3 样本：人全血，适用抗凝剂为 EDTA 或枸橼酸钠等，不得以肝素抗凝。不分病种、检测目的、性别、年龄。

1.4 质控品：该试剂盒中均包含正常野生型质控品，同时实验室提供4个已知突变的阳性质控品，以保证结果的准确可靠。 2. 内容与方法

根据产品说明书标示的性能指标，验证以下内容：

1.1 阳性符合率：已经测序确定为特定突变的核酸4（4例，每种类型突变一例）例，由本实验室使用待评价试剂盒进行测试，结果应与已知结果一致，阳性符合率应达到100%。

1.2 阴性符合率：已经测序确定为野生型的核酸2（2例，正常人）例，由本实验室使用待评价试剂盒进行测试，结果应与已知结果一致，阳性符合率应达到100%。

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1.3 空白验证：用实验室常用灭菌纯水代替样本，由本实验室使用待评价基因检测试剂盒进行1次测试，结果应均为未检出。

1.4 检测重复性：取已知结果样本2（2例，涵盖已知阳性一例，阴性一例）份，未知结果样本2（2例，正常人标本）份，由本实验室使用待评价基因检测试剂盒分别进行3次测试，3次检测结果应一致。

1.5 检测灵敏度：测量试剂盒中自带核酸浓度，由本实验室使用待评价基因检测试剂盒进行 3 次测试，结果应正确。 3. 设备

1.1 台式高速离心机 1.2 恒温金属浴 1.3 涡旋振荡器 1.4 分光光度计 1.5 PCR扩增仪 1.6 水浴锅

1.7 晶芯®SlideWasher 24芯片洗干仪 1.8 晶芯® LuxScan 10K-B微阵列芯片扫描仪 4. 实验要求

1.1 实验室要求：严格按照临检中心要求进行分区，保证实验的规范操作和结果的准确可靠。

1.2 实验室设备：各项性能指标应在参考范围之内，经工程师调试安装后方可进行常规实验操作。

1.3 实验操作人员：应熟悉方法原理与操作，能对样本进行正确处理，并按流程顺利进行DNA 抽提、PCR扩增、芯片杂交、洗片与扫描操作。

1.4 实验前，本实验室需按照待评价产品说明书要求建立实验检测条件，并通过阳性对照和阴性对照试验。

1.5 严格按照试剂盒说明书要求保存产品及全血样本。 5. 操作程序

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1.1 检测流程：全血标本编号标记→检测前准备→提取 DNA→PCR扩增→芯片杂交→洗片与扫描→输出结果。

1.2 检测步骤严格按照相关标准操作规程。

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三、 验证结果

1. 阳性符合率：结果见下表。

操作者 操作日期 样本号 1 2 3 4 徐圳，何婕 2017年8月17日 测序结果 235 del C杂合突变 538 C > T杂合突变 299_300 del AT杂合突变 2168 A > G杂合突变 审核者 审核日期 石坚 2017年8月18日 本实验室检测结果（基因型） 235 del C杂合突变 538 C > T杂合突变 299_300 del AT杂合突变 2168 A > G杂合突变 阳性样本号1原始数据显示：

阳性样本号2 原始数据显示：

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阳性样本号3原始数据显示：

阳性样本号4原始数据显示：

本实验室4个样本分别检测1次，结果与测序完全一致，阳性符合率100%。 2. 阴性符合率：结果见下表。 操作者 操作日期 样本号 5 6

徐圳，何婕 2017年8月17日 测序结果 试剂盒范围内的九个位点均野生 试剂盒范围内的九个位点均野生 审核者 审核日期 石坚 2017年8月18日 本实验室检测结果（基因型） 试剂盒范围内的九个位点均野生 试剂盒范围内的九个位点均野生 7

阴性样本号5原始数据显示：

阴性样本号6原始数据显示：

本实验室2个样本分别分别检测1次，结果与测序完全一致，阴性符合率100%。

3. 空白对照：结果见下表 操作者 徐圳，何婕 审核者 审核日期 石坚 2017年8月18日 操作日期 2017年8月17日 样本号 NC

本实验室检测结果（基因型） 只有QC、PC、MC质控探针信号 8

空白对照样本原始数据显示：

本实验室1个空白检测1次，结果与理论结果完全一致，。 4. 检测重复性：结果见下表。 操作者 徐圳，何婕 审核者 审核日期 石坚 2017年8月18日 操作日期 2017年8月17日 样本号 1 5 7 8 本实验室检测结果（基因型） 235 del C杂合突变 试剂盒范围内的九个位点均野生 试剂盒范围内的九个位点均野生 试剂盒范围内的九个位点均野生 阳性样本1重复性第一次原始数据显示：

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阳性样本1重复性第二次原始数据显示：

阳性样本1重复性第三次原始数据显示：

本实验检测结果重复3次结果完全一致，重复率100%。 5. 检测灵敏度：结果见下表。

操作者 操作日期 样本号 试剂盒自带核酸稀释（80ng/ul） 试剂盒自带核酸稀释（40ng/ul） 试剂盒自带核酸稀释（20ng/ul）

徐圳，何婕 2017年8月17日 审核者 审核日期 石坚 2017年8月18日 本实验室检测结果（基因型） 试剂盒范围内的九个位点均野生 试剂盒范围内的九个位点均野生 试剂盒范围内的九个位点均野生 10

样本浓度为80ng/ul样本原始数据显示：

样本浓度为40ng/ul样本原始数据显示：

样本浓度为20ng/ul样本原始数据显示：

本实验检测结果分别检测1次结果完全一致。

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四、 检测结果说明

本试剂盒用于检测人全血基因组 DNA 中与遗传性耳聋相关的9个突变位点，检测结果可以辅助临床诊断，也可用于流行病学调查及产前筛查、新生儿筛查等领域，试剂盒检测指标如下表：

表1 试剂盒检测指标

基因名称 突变位点 35 GJB2 176 235 299 SLC26A4 IVS7-2 2168 1555 1494 538 突变位点描述 35 del G 176 del 16 235 del C 299 del AT IVS7-2 A>G 2168 A>G 1555 A>G 1494 C>T 538 C>T 线粒体12S rRNA GJB3 GJB2基因编码缝隙连接蛋白26，缝隙连接蛋白调控细胞间的离子交换，耳蜗毛细胞中高表达。GJB2基因突变相关的耳聋为隐性遗传方式，当发生纯合突变时，影响离子通道正常功能，患者出生即表现出耳聋症状，此突变导致的耳聋预示良好的人工耳蜗移植效果。

SLC26A4基因编码pendrin蛋白，pendrin蛋白属于离子转运体家族，调节细胞膜离子转运。SLC26A4基因突变相关的耳聋为隐性遗传方式，当发生纯合突变时，患者脑部抗压力变化能力降低，患感冒、头部受打击时，听力急剧下降。此突变个体应避免颅压增大和使用耳毒性药物，建议使用改善微循环药物和神经营养药治疗。

12S rRNA基因编码产物结构类似细菌16S核糖体RNA，该基因突变携带者使用氨基糖苷类药物会引起耳蜗的ATP合成障碍，导致重度耳聋的发生，因此检出此类突变的个体应终身慎用氨基糖苷类抗生素药物。同时，由于该基因为

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线粒体遗传方式，突变个体的母系家族成员同样需终身慎用氨基糖苷类抗生素药物。

五、 验证结论

经验证，本实验室使用北京博奥生物集团有限公司晶芯®九项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法）[国食药监械（准）字 2013 第 3401518 号]的检测符合率、重复性和灵敏度等性能指标能够达到厂家的性能要求，验证通过。

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