荷叶中荷叶碱提取工艺的研究_赵骏

中草药　ChineseTraditionalandHerbalDrugs　第34卷第10期2003年10月

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荷叶中荷叶碱提取工艺的研究

赵　骏,王洪章,齐喜红,高敏燕,高　钊

(天津中医学院,天津　300193)

X

　　荷叶为睡莲科植物莲NelumbonuciferaGaertn.的干燥叶,具有清热利湿,升发清阳,降脂减肥、止血散瘀等作用。《本草纲目》载:“荷叶服之,令人瘦劣,单服可以消阳水浮肿之气。”今用荷叶配方生产降脂减肥茶者颇多。据报道,将荷叶用乙醇回流提取后制成浸膏片具有良好的调血脂作用。国外尤其是日本关于荷叶化学成分的研究报道较多,主要是生物碱类、黄酮类、鞣质类成分。我国的荷叶资源丰富,价廉易得,为可开发的天然药用植物资源。本实验以荷叶生物碱为指标,利用不同的溶媒采用加热回流法和超声提取,大孔吸附树脂纯化来优化提取工艺。

1　仪器、试剂和材料

　　DU—530紫外可见分光光度计(美国Beck-试剂均为man公司),电子天平(上海天平仪器厂)。分析纯。荷叶购于天津中医学院门诊部,经本院药用植物教研室鉴定为睡莲科植物莲N.nuciferaGaertn.的干燥叶片。荷叶碱对照品(山东医学科学院药物研究所提供)。2　实验方法

2.1　提取荷叶中总生物碱的正交设计:对不同溶媒加热回流和不同提取方法的影响因素及水平见表1,2。

2.2　荷叶总生物碱的提取与纯化:称取荷叶100g,加入表1中的溶剂2000mL浸泡,按表2方法提取。滤过,合并滤液,回收溶剂至100mL,有机溶剂提取液拌入适当的树脂,挥去乙醇,再将拌有样品的树脂加到预先填好的大孔吸附树脂柱(药材与树脂

X收稿日期:2002-10-12的比例为1∶2～1∶3)上;酸水提取液经0.5%氢氧化钠溶液调pH9～11,直接上柱。先水洗去杂质,再用乙醇-水洗脱,减压回收乙醇,挥干得总生物碱。

表1　不同溶媒加热回流提取因素水平表Table1　Factorsandlevelsbyheatingand

refluxingwithdifferentresolvers

水平1

23

因　　素

A溶剂95%乙醇

甲醇0.5盐酸

B回流时间/h

1.52.02.5

C提取次数

123

表2　不同提取方法因素水平表Table2　Factorsandlevelsbydifferent

extractingmethods

水平12

因　　素

A溶剂0.5%盐酸0.5%醋酸

B提取方法

超声回流

C提取时间/h

1.52.0

2.3　对照品溶液的配制:精密称取减压干燥至恒重的荷叶碱对照品4.5mg,氯仿定容至10mL。精密吸取4mL,加入20mL氯仿及4mL溴甲酚绿缓冲液于分液漏斗中萃取,取20mL氯仿层于试管中,加0.01mol/L氢氧化钾溶液、无水乙醇各5mL摇匀,精密吸取上层溶液6mL于10mL量瓶中定容,即得。

2.4　标准曲线的制备:分别精密吸取荷叶碱对照品溶液0.1,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,5.0mL置于干燥具塞试管中,加氢氧化钾溶液及无水乙醇的混合液至5mL,摇匀。以氢氧化钾溶液和无水乙醇的混合

中草药　ChineseTraditionalandHerbalDrugs　第34卷第10期2003年10月

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液为空白,按分光光度法在622nm处测定吸光度,得回归方程A=0.0568+0.5159C,r=0.999。2.5　提取物中生物碱的含量测定:取样品称重,用氯仿配成一定浓度的溶液,精密吸取样品提取液1mL,加入5mL氯仿及1mL溴甲酚绿缓冲液于分液漏斗中,振摇,静置。分取氯仿层4mL于刻度试管中,加入0.01mol/L氢氧化钾溶液、无水乙醇各3mL,摇匀,静置,取上层蓝色溶液测定A值并计算生物碱含量。3　实验结果

3.1　不同溶媒加热回流的结果:见表3。方差分析见表4。根据方差分析,其影响因素的顺序为A>提取次数、回流时间的顺序减C>B,即依溶剂种类、

弱。回流时间对试验影响差异不具有显著性。综合生产中的节能、节时原则,加热回流提取的最佳工艺是用0.5%盐酸提取2.0h,提取次数为2次。

表3　不同溶媒加热回流提取的测定结果Table3　Extractingresultsbyheatingand

refluxingwithdifferentresolvers

编号123456789

A111222333

B123123123

C123231312

D(误差)

123312231

生物碱量/mg

8.7116.9737.4021.2832.7016.7246.8826.0852.32

于超声提取法,且用酸水提取2.0h时生物碱量较高,而且95%乙醇提取物纯度较高。综合两者来考虑荷叶生物碱的提取工艺,其最佳工艺为:采用0.5%盐酸,加热回流2.0h,提取2次。

表5　不同提取方法生物碱的测定结果Table5　Resultsbydifferentextractingmethods

编号12345678

A11112222

B11221122

C11222211

D(误差)

12121212

生物碱量/mg

20.8221.0852.2151.9721.6822.4842.0940.96

表6　不同提取方法的方差分析

Table6　Varianceanalysisbydifferentextractingmethods

方差来源ABCD(误差e)

离差平方和自由度　44.511279.42　68.39　　0.012

1111

方差　44.511279.42　68.39　　0.012

F值　3709.17106618.33　5699.17

显著性P<0.05P<0.01P<0.01

　　F0.05(1,1)=161.4　F0.01(1,1)=4052

4　讨论

4.1　用乙醇提取荷叶总生物碱,其纯度较高,为了探讨醇度对提取工艺的影响,本试验采用不同浓度的乙醇即95%,80%,70%,50%乙醇提取,结果显示浓度越低提取量越少。

4.2　为了探讨酸度对提取工艺的影响,本实验采用不同浓度的盐酸即1%,0.5%,0.3%,0.1%盐酸提取。结果表明随着酸的浓度的减少,总生物碱的提取量也减少。虽然1%盐酸的提取量稍大,但在浓缩时酸的浓度高,对空气的污染较大,因此认为0.5%盐酸提取为最佳工艺。

4.3　提取荷叶生物碱时,由于荷叶轻,易上浮,所以溶剂不能充分浸泡荷叶,这可能对提取效果有一定影响。若将荷叶研成碎片,产量或许会增加。

References:

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表4　不同溶媒加热回流提取的方差分析Table4　Varianceanalysisbyheatingandrefluxing

extractionwithdifferentresolvers

方差来源ABC

D(误差e)

离差平方和767.32201.94723.2830.13

自由度2222

方差

F值

显著性P<0.05P<0.05

383.6625.47100.976.70361.6424.0115.065

　　F0.05(2,2)=19.00　F0.01(2,2)=99.00

3.2　不同提取方法的结果:见表5。方差分析见表6。从方差分析,加热回流比超声提取产量高,而醋酸比盐酸提取的生物碱总量高,但相对含量较低,因此,综合考虑其最佳提取工艺仍为5%盐酸加热回流2.0h,回流2次。

　　从以上可见,采用加热回流提取法产量明显高