一代测序与二代测序的区别与联系

Sanger 法测序（一代测序)

Sanger 法测序利用一种 DNA 聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物.直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTP)， 并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸（ddNTP)。由于 ddNTP 缺乏延伸所需要的 3-OH 基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在 G、A、T 或 C 处终止.终止点由反应中相应的双脱氧而定.每一种dNTPs 和 ddNTPs 的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物.它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用 X—光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。 高通量测序（二代测序)

高通量测序技术(High-throughput sequencing，HTS）是对传统 Sanger 测序（称为一代测序技术）革命性的改变, 一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定, 因此在有些文献中称其为下一代测序技术（next generation sequencing，NGS )足见其划时代的改变， 同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能， 所以又被称为深度测序(Deep sequencing)。

第一代和第二代测序技术

大约第平台X公司 名称 代 数） ABI/第生命一技术代 公司 L GeXP第贝克一曼 代 系统 序法 分析电泳测光学 00 列和多聚序列；易遗传毛细管荧光/—10很好处理重复序较高 序法 桑格-600次性达标率高,能的制备成本相对730x电泳测3130桑格—样品制备高读长，准确度一通量低；法 方法 (碱基测序方检测读长优点 相对局限性 xL—3毛细管荧光/600-1次性达标率高，能成本高,使之难以光学 000 很好处理重复序列和多聚序列 高读长，准确度一做大量的平行测序 通量低;单个样品小型化 基因第罗氏二/454 代 FLX系统 HiSeq可逆链第以鲁二米那 代 q 测序法 很高测序通量;在miSe和合成光学 0 2000/终止物序仪测序法 0 测序通量大 组测焦磷酸光学 —40230在第二代中最高样品制备较难；难于处理重复和同读长；比第一代的种碱基多聚区域；试剂冲洗带来错误累积；仪器昂贵 仪器昂贵;用于数荧光/2x15很高测序通量 据删节和分析的费用很高 测序运行时间长；5500第二OLiD iD系代 统 因组的试剂成本难；仪器昂贵 最低 读长短，推高了测第赫利二克斯 代

广为接受的几种读长短，造成成本连接测序法 荧光/光学 25—35 第二代平台中，所高，数据分析困难要拼接出人类基和基因组拼接困ABI/SxlSOL单分子Helis合成测cope 序法 光学 荧光/高通量；在第二代序成本,降低了基25-30 中属于单分子性因组拼接的质量；质的测序技术 仪器非常昂贵 —-——资料来源于文献：尹银亮、陈会平、毛良伟《新一代DNA测序技术总览》